使用熒光濾光片需要注意哪些

　　熒光濾光片一般包含三片組合，即激發(fā)濾光片、發(fā)射濾光片和二色鏡。有的系統不帶二色鏡，這由光路結構決定。有的系統用激光進(jìn)行激發(fā)，不需要激發(fā)濾光片。
 

　　激發(fā)濾光片：在熒光顯微鏡中，只有激發(fā)熒光的波長(cháng)可通過(guò)的濾光片。過(guò)去使用的是短波通濾光片，現在基本上都使用帶通濾光片。與顯微鏡的光路呈45°角放置。
 

　　在基因表達分析中，熒光濾光片可以用來(lái)減少檢測樣品量，提高檢測效率，并增強PCR檢測的靈敏度和特異性。它有助于熒光標記物從原始樣品中分離出來(lái)，以防止影響重復實(shí)驗中熒光信號檢測的不確定因素。
 

　　在生物標志物鑒定和基因組等研究中，熒光濾光片也可以通過(guò)精準有效地檢測出少量的核酸片段，大大提高分子檢測的準確性。
 

　　熒光濾光片使用須注意：

 

　　1、濾光片的順序不能顛倒，在透射熒光顯微鏡中，最靠近光源處為吸熱濾光片，次之應放置激發(fā)濾光片組合，而后為被檢標本，最后安放阻擋濾光片。在落射熒光顯微鏡應用中，在激發(fā)濾光片和被檢標本之間必須加進(jìn)色光分離反射濾光片(FT或RKP)。
 

　　2、使用濾光片時(shí)必須遵守斯托克斯定律，吸熱濾光片的透射波長(cháng)<激發(fā)濾光片的透射波長(cháng)<色光分離反射濾光片的透射波長(cháng)<阻擋濾光片的透射波長(cháng)。
 

　　3、使用濾光片時(shí)必須注意配用濾光片的透射譜線(xiàn)之間愈是相互靠近愈好。